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免疫細胞療法における細胞加工の安全管理に関する報告
Egawa K: On the safety assurance of cell processing carried out in medical institutions for autologous immuno-cell therapy, Hum Cell, 17(1): 1-6 2004 から抜粋 （原文抜粋はこちら）【邦訳】
医療機関で医療行為として細胞加工処理を行う場合、その安全性や品質に対して行政の規制は存在しない。各医療機関の独自の自主規制に委ねられる。今日の日本では、、いくつかの医療機関が厳重な規制を自ら課しているが、自主規制を設けずに行っている医療機関もある。したがって、標準化された指針を設けるのが最も重要である。
以下は日本での先駆的な免疫細胞療法の医療機関である瀬田クリニックグループ（表 II ）で行われている安全管理についての自主規制である。自主規制は基本的に医薬品 GMP を参考にしている。この記述はそのような指針を作成するのに役立つかもしれない。
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瀬田クリニックグループでの安全管理指針
1.施設に関する安全基準
クリーンエリアはクラス 10,000 に保たれている。クリーンエリア内には培養および品質管理のためのクリーンルーム、廊下、入り口が設けられている。入り口は一次、二次更衣室、エアロックを設けた前室からなる。資材は滅菌室とエアロックを通して持ち込まれる。２種類のクリーンルームが存在する。第１の部屋は、感染性疾患のない患者から採取した血液の処理と品質管理、第２の部屋は病原微生物あるいはその抗体が検出された血液を処理する場所である。室間差圧は、清浄度の高い部屋から低い部屋へ常時流れるように空調により制御されている。第２の部屋は外部より陰圧に設定されている。
クリーンベンチはクラス 100 を使用する。第２の部屋ではバイオハザード用のクリーンベンチを使用する。クリーンベンチは冷却遠心器と一連の作業に必要なディスポザブルの器材とともに設置されている。この方法により、作業は他と交叉することなく１つのクリーンベンチで完結する。資材や加工細胞は品質管理室などのクリーンルームと一般区域とを分離するためのパスボックスを通して出し入れされる。
2.衣類
クリーンエリアに入る場合は滅菌した無塵衣を着て、プラスティック手袋、滅菌した履物を身に付ける。
3.人員
培養に従事するスタッフと品質管理に従事するスタッフはお互いに独立した部門に属することで品質管理を厳密に行う。
4.
トレーニング
クリーンルーム内で仕事をする人は無菌操作と細胞処理のトレーニングを受ける期間を必要とする。三ヶ月のトレーニング期間の後に、内部の技術者認定試験を受けなければならない。
5.
標準作業手順書
標準作業手順書は厳密に各クリニックにおいて作成する。すべての手順の書類を監査においてチェックすることで、確実に遵守されていることを確認する。
6.
書類とトレーサビリティ
すべての資材、作業、観察項目は書類に記録する。培養器の温度、二酸化炭素濃度は自動的に記録される。各作業過程での材料の一部である処理前の血液サンプル、培養開始途中の検体サンプル、患者へ注入される最終加工細胞のサンプルは凍結保存される。仮にたとえば、細菌汚染などが生じた場合は、これらのサンプルによりどの過程でそれが起こったかを明らかにできる。
7.医薬品以外の他人（同種）由来の蛋白を材料から排除する
同種蛋白は、それらが医薬品として認可されていない場合は可能な場合は排除する。それらは少なくとも部分的には培養液に添加される血漿、血清が含む蛋白で代用できる。患者の自己血漿あるいは血清を可能な限り使用する。自己血漿あるいは血清の質が病気のために細胞の増殖を支持するのに不十分な場合にのみ、同種（他人）の血漿あるいは血清を感染症の検査を行った上で使用する。
8.
感染症の検査
細胞加工する血液を受け入れる前に患者は感染症の検査を行う。検査項目は B 型肝炎ウイルス表面抗原、抗体、 C 型肝炎抗体、 HIV 抗体、 HTLV 、梅毒血清反応を含む。
9.
品質検査
細胞培養の工程中で、細胞の形態、数、生細胞率、細菌、真菌汚染、エンドトキシンは数回繰り返し検査する。細菌、真菌汚染は材料とする血液、培養途中、最終加工細胞について血液寒天培地、サブロー培地、チオグリコール酸培地により検査する。エンドトキシンは最終加工細胞について投与前に検査する。リアルタイム PCR によるマイコプラズマの検査の準備を行っている。フローサイトメトリーによる解析は三ヶ月間に 50 検体を無作為に選んで行っている。これは細胞の培養、活性化が再現性をもって行われていることを確認するものである。
10.第三者機関による監査
医療機関による自己規制は第三者機関による監査によって認証を受けることが推奨される。これを目的に瀬田クリニックグループの各クリニックの、細胞加工のための品質システムは、 ISO9001 の認証を 2004 年 3 月に受けた（細胞医療支援サービスにより行われている） ＊ 。
＊訳者による補足
安全管理の結果以上の自己規制の結果により作業場所での清浄度は Table III のように保たれた。
| 表 II. 瀬田クリニックグループにおけるクリーンルーム |
名称 |
所在地 |
開始時期 |
リンパ球培養処理可能数
治療数 / 年 |
| 瀬田クリニック |
東京 |
Apr. 1999 |
400 |
| 新横浜メディカルクリニック |
横浜 |
|
|
クリーンルーム 1 |
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Nov. 2001 |
400 |
クリーンルーム 2 |
|
Jul. 2002 |
1200 |
| かとう緑地公園クリニック |
大阪 |
Jun. 2003 |
400 |
| 福岡メディカルクリニック |
福岡 |
Nov. 2003 |
400 |
| 表 III. 培養設備の清浄度 |
| 場所 |
Shin-Yokohama Medical Clinic
(Particle number per cubic feet) |
| 外部 |
63,224 |
| 一次更衣室 |
14,923 |
| 二次更衣室 |
10,542 |
| エアーロック通路 |
6,059 |
| エアーロック |
3,514 |
| クリーンルーム内廊下 |
1,066 |
| クリーンルーム |
644 |
| クリーンベンチ |
<100 |
原文
When cell processing is carried out in medical institutions as a part of medical procedures, there is no government regulation any more with regard to safety and quality. These are left to self-regulation of each medical institution. In the present day Japan, some medical institutions impose strict self-regulation on themselves, while others do not. It is most important, therefore, to construct a standard guideline for the self- regulation.
The following is how self-regulation with regard to safety and quality assurance is carried out in Seta Clinic Group (Table II), the leading group of clinics in Japan specialized in immuno-cell therapy. The self-regulation basically follows good manufacturer's practice (GMP) in the case of pharmaceutical production . The description may helpful to construct such a guideline.
Guidelines for safety assurance in Seta Clinic Group
1. Safety criteria of the facility
Clean area is maintained in class 10,000 condition. The clean area contains clean rooms for cell culture, those for quality assurance, passages and entrance area. The entrance area is composed of the primary and the secondary gowning rooms, passage room to an air lock room. Materials are brought into the clean area through a sterilizing area and an air lock room. There are two types of the clean rooms. Type I clean rooms are for processing of blood obtained from patients without detectable infectious diseases and for quality control. Type II clean rooms are for processing of patients' blood in which pathogens or antibodies to pathogens were detected. Differential atmospheric pressure is created using air conditioners exclusively used for the clean areas so that the air flows constantly from areas where higher cleanliness is required to the less clean areas. The pressure of the type II clean rooms is kept negative to the outside.
Clean benches used are of class 100. Those used in type II clean rooms are type IIA biohazard clean benches. A clean bench is accompanied with a refrigerated centrifuge and a movable bench on which a set of disposable equipment necessary for one round of procedure is supplied. By this way, manipulation can be completed at one clean bench without sharing anything with others.
Materials are brought into and the products are brought out of the clean area though pass boxes which divide the clean room for quality assurance and outside area.
2. Clothing
Those who enter the clean area should wear sterilized dust-free gown, plastic gloves and sterilized shoes.
3. Personnel
Those who engage in cell processing and those who work in quality control section belong to groups independent to each other to ensure strictness of the quality control.
•4.Training
People who are to be accepted to work in the clean rooms must undergo a period of training of aseptic procedures and of cell processing. After about 3 months training, they must be qualified by internal checking.
5. Standard operation procedures (SOP)
Standard operation procedures are constructed precisely in each clinic and its observance is ensured by checking documents left after all procedures.
6. Documentation and traceability
All materials, procedures and findings are recorded as documents. Also, temperature and carbon dioxide concentration of each incubators are recorded automatically.
A portion of the materials at each step of the processing, including the starting blood sample, samples during the course of cell culture and the final product to be infused to the patient, is kept frozen. If, for example, bacterial contamination happened, it could be traced back using these materials and at which stage the contamination happened could be clarified.
7. Elimination of allogeneic proteins without pharmaceutical approvals from the material
Allogeneic protein are eliminated when possible if the protein did not have approval of pharmaceutical production. They are partly, at least, replaced by the proteins contained in serum or plasma added to the media. Also, autologous serum or plasma is used when possible. Only when the quality of the autologous serum or plasma is not sufficient to support the cell growth due to the disease of the patient, allogeneic serum or plasma, obtained from donors after examination of infectious diseases, is utilized.
8. Patients are subjected to examinations of infectious diseases before acceptance of their blood for cell processing. The items of examination include human hepatitis B virus s-antigen, antibody to human hepatitis B virus s-antigen, antibody to human hepatitis C virus, antibody to human immunodefficiency virus, antibody to human T cell lymphoma virus and serological tests for syphilis.
9. Quality examinations
During the course of the cell culture, appearance of cells, cell number, viability, bacterial or fungal contamination and bacterial endotoxin contamination are repeatedly examined. Bacterial and fungal contaminations are examined on the starting blood material, at the middle of the culture and on the final product by cultivation on blood agar plate, Saboruraud medium and thioglycolate medium. Bacterial endotoxin test is carried out on the final product to be infused before the infusion. Examination of toxoplasma by real time PCR is now being arranged. Also, flow cytometric analysis is performed with about 50 samples randomly selected in 3 months. This is to ensure that activation and propagation of the cells take place with reproducibility.
10. Inspection of the self-regulation by outside organization
It is recommended that the self-regulation by the medical institutions be inspected and approved by outside organization. For this purpose, each clinic of the Seta clinic group obtained attestation of ISO9001 in March 2004.
Result of the safety assurance
As a result of above-mentioned self-regulation, cleanliness of the working area is kept as shown in Table III.
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